Contraste de fases | Contraste de fases

 

PALABRAS CLAVE:  imagen de células vivas, contraste, índice de refracción, DIC, contraste de fases apodizado, contraste de modulación Hoffman

 

DEFINICION:

La microscopia de contraste de fases es una técnica óptica que explota los cambios en el índice de refracción para producir imágenes de alto contraste de especimenes transparentes.

 

TECNOLOGÍA:

En las imágenes de contraste, los pequeños cambios en la longitud del camino óptico (conforme la luz se mueve a través de materiales diferentes de diferentes índices de refracción, por ejemplo, agua, componentes celulares) son trasladados ópticamente dentro de los cambios correspondientes en la intensidad de la luz, los cuales pueden ser observados como diferencias en los contrastes de la imagen.

La luz desde una lámpara de halógeno-tungsteno es dirigida a través de un lente colector y enfocada en anillos especializados posicionado en el condensador. Los frentes de onda pasando a través del anillo iluminan al espécimen y pasan directamente a través de estos o son difractados y retardados por los gradientes de fase en el espécimen. La luz sin desviar y difracta colectada por el objetivo es separada por un plato de fases y enfocada en el plano intermedio de la imagen para formar la imagen final. Un desventaja de las imágenes de contraste de fases es la ocurrencia de “halos” alrededor de las áreas de alto desplazamiento de fases.

 

APLICACIONES:

La imagen de contraste de fases es aplicable a varios objetos transparentes, como células vivas en cultivos, micro-organismo, rebanadas delgadas de tejido, patrones litográficos, vibras, dispersiones de látex, fragmentos de vidrio, y partículas subcelulares (incluyendo núcleos y otros organelos)  donde la técnica revela estructuras que no son visibles en campo claro. Una ventaja de la microscopia de contraste de fases es que las células vivas pueden ser observadas en detalle sin la necesidad de teñirlas o usar fluoróforos.

 

IMAGEN: Imagen Ejemplo – preferiblemente contrastada con campo claro

 

CONFIGURACIÓN DEL MICROSCOPIO:

La capacidad de contraste de fases se puede agregar a casi cualquier microscopio de campo claro, utilizando los objetivos de contraste de fases especializados que se conformen a los parámetros de longitud de tubo y un condensador que acepte anillos de fase del tamaño correcto. Nikon, y los principales fabricantes de microscopios, brindan accesorios de contraste de fases para sus sistemas de investigación para microscopios biológicos verticales e invertidos así como para sus microscopios educacionales.

 

SISTEMA RECOMENDADO:

Series invertidas Nikon Ti y TE2000 y los microscopios de las series Eclipse-i. La tecnología original patentada de Nikon de contraste de fases apodizada reduce los efectos de halo en las imágenes de contraste de fases.

 

LIGAS:

Contraste de fases: [microscopyu]

Configuración del microscopio para contraste de fases: [microscopyu]